Trealamh Trascríobh Ardtáirgeachta T7

 

Ainm Táirge	Cat.Uimh.	Spec.
Trealamh Trascríobh Ardtáirgeachta T7	G3021-50T	50 T

 

 

Is córas iomlán é an T7 High Yield Trascription Kit chun RNA a shintéisiú go héifeachtúil le haghaidh tóireadóirí hibridithe blot in situ, measúnachtaí cosanta ribonuclease, modhnuithe iar-thrasscríofa lena n-áirítear splicing RNA agus polyadenylation, agus le haghaidh aistriúcháin in vitro. Tá T7 RNA polymerase an-sonrach dá thionscnóir féin agus déanfaidh sé méideanna móra RNA a thras-scríobh ó sheichimh DNA (mar shampla, plasmids, blúirí imoibriú slabhrúil polaiméaráise (PCR), nó DNA Sintéiseach) le sruth óna tionscnóir,

Sa chóras imoibrithe, is féidir le 1 ug ionchur teimpléid níos mó ná 100 ug de RNA a tháirgeadh, atá oiriúnach chun faid éagsúla RNA a ullmhú.

 

 

 

Long le oighear fliuch; Stóráil ag -20 céim , bailí ar feadh 12 mhí.

 

 

Uimhir na Comhpháirte	Comhpháirt	G3021-50T
G3021-1	T7 RNA Trascríobh Einsíme Meascán	200 μL
G3021-2	Maolán Frithghníomhú Trascríobh 5×T7	250 μL
G3021-3	25 mM NTP Meascán	100 μL
G3021-4	DNA I	50 μL
G3021-5	Uisce Gan Núicléas	1 ml
G3021-6	Teimpléad Rialaithe (0.5 ug/μL)	10 μL
Lámhleabhar		Cóip amháin

 

 

1. Ullmhúchán don teimpléad :

a. Plasmid ina bhfuil an tionscnóir T7 : chun RNA de fhad sonrach a fháil, ba cheart an plasmid a líneáil go hiomlán agus a íonú mar theimpléad. Ba cheart go gcruthódh líneáil plasma le heinsím srianta forbhrón 5 'nó foirceann mhaol (seachain deireadh 3' protruding). Is é ~1 ug an méid teimpléad a mholtar in aghaidh an imoibrithe;

b. An táirge PCR nó an DNA sintéiseach: déanann an 5 'deireadh primer den snáithe neamhchódaithe comhcheangailte leis an seicheamh ó thionscnóir T7 (5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3') aimpliú PCR. Is féidir leis na táirgí PCR a bheith ann. a úsáidtear go díreach mar theimpléid trascríobh gan íonú, ach méadófar toradh RNA tar éis íonú. Is é ~0 an méid teimpléad a mholtar in aghaidh an imoibrithe.5 ug.

2. Imoibriú aistriúcháin in vitro :

a. Cuir an comhábhar seo a leanas isteach i bhfeadán steiriúil, saor ó núicléas ar oighear san ord léirithe

b. Measc go réidh agus lártheifneoir go hachomair.

c. Goir ag 37 céim ar feadh 2 h. (Coigeartaigh an t-am imoibriúcháin ag brath ar an spriocfhad agus an toradh RNA atá ag teastáil. Mar shampla , RNA níos lú ná 300 nt, moltar gor ar feadh 4 u nó níos faide).

Comhpháirt	Méid	Conc deiridh.
Teimpléad	0.5-1 ug	25-50 µg/mL
Maolán Frithghníomhú Trascríobh 5×T7	4 μL	1×
25 mM NTP Meascán	2 μL	2.5 mM
T7 RNA Trascríobh Einsíme Meascán	4 μL
Uisce Gan Núicléas	Suas le 20 μL	--

3. Cóireáil DNA I

Tar éis an imoibrithe, cuir 1 μL de DNase I leis, measc go hachomair agus gor ag 37 céim ar feadh 15 nóiméad.

4. Cainníochtú táirgí trascríobh

a. Anailís leictreafóiréis glóthach

Moltar glóthach agarose formaildéad 1% a dhínádúrú.

b. Modh ionsú UV

An tiúchan de tháirgí RNA arna chinneadh ag trealamh ionsú UV tar éis purificaton (Beidh tionchar ag núicléitídí saor in aisce ar chruinneas cainníochtaithe).

 

 

1. Caith lámhainní agus maisc oiriúnacha le do thoil agus bain úsáid as ábhair indiúscartha saor ó RNase chun éilliú RNase a chosc.

2. Chun RNA lipéadaithe a ullmhú, cuir an t-imoibrí cuí in ionad an NTP Mix sa trealamh.

3. Ba é 500 nt fad trascríobh an teimpléid rialaithe sa trealamh.

4. Ar mhaithe le do shláinte agus sábháilteacht, caith spéaclaí sábháilteachta, lámhainní nó éadaí cosanta.

 

Chun Úsáid Taighde Amháin!

 

 

Clibeanna Te: t7 trealamh trascríobh ard-toraidh, monaróirí trealamh trascríobh ardtoraidh tSín t7, soláthraithe, monarcha