Fola MagBind Iomlán RNA Eastóscadh Kit

 

Ainm Táirge	Cat. Níl.	Spec.
Fola MagBind Iomlán RNA Eastóscadh Kit	G3611-50T	50 T

 

 

Úsáideann MagBind Blood Total RNA Extraction Kit coirníní maighnéadacha superparamagnetic atá deartha le haghaidh eastóscadh agus íonú aigéad núicléach chun RNA iomlán a bhaint as samplaí fola úra. Is féidir leis an trealamh seo RNA ardíonachta a fháil trí leukocytes a líseáil chun an t-aigéad núicléach ann a scaoileadh tar éis cealla fola dearga a bhaint le tuaslagán líseála atá optamaithe go speisialta, ansin RNA a adsorrú faoi choinníollacha áirithe ag coirníní maighnéadacha superparamagnetic le héifeacht scaradh, agus an RNA asaithe a scaoileadh ag na coirníní maighnéadacha. tar éis na coinníollacha a athrú. Is féidir an RNA a bhaintear a úsáid go díreach i dturgnaimh bitheolaíochta mhóilíneacha éagsúla mar RT-PCR, RT-qPCR, Northern Blot, aistriúchán in vitro, anailís cosanta RNase agus clónáil mhóilíneach.

 

 

Seoltar DNase,DTT Solution le leac oighir fhliuch, a stóráiltear ag -20 céim ; Seoltar imoibrithe eile agus stóráiltear iad ag teocht an tseomra; bailí ar feadh 12 mhí.

 

 

Uimhir na Comhpháirte	Comhpháirt	G3611-50T
G3611-1	10 × Maolán Lysis ceall dearg	60 ml
G3611-2	Maolán BRL	30 ml
G3611-3	Maolán RW1	12 mL (18 mL d'eatánól ainhidriúil curtha leis roimh úsáid)
G3611-4	Maolán RW2	20 mL (80 mL d'eatánól ainhidriúil curtha leis roimh úsáid)
G3611-5	Coirníní SweMag	1 ml
G3611-6	Réiteach DTT	1.2 mL
G3611-7	DNA	500 μL
G3611-8	10×DNase Maolán	1 ml
G3611-9	Uisce saor ó Núicléas	12 ml
Lámhleabhar		Cóip amháin

 

 

1. Má tá deascán déanta i Buffer BRL, le do thoil é a thuaslagadh trí théamh ag 37 céim agus é a úsáid tar éis dó filleadh ar teocht an tseomra.

2. Cuir Réiteach DTT le Maolán BRL roimh úsáid go dtí tiúchan deiridh 4%, ie, 1 mL Maolán BRL go 40 µL Réiteach DTT. Is fearr an lysate seo a ullmhú réidh le húsáid, agus is féidir Buffer BRL a chuirtear le Réiteach DTT a stóráil ag 4 chéim ar feadh míosa.

3. Sula n-úsáidtear é, cuir 18 mL d'eatánól absalóideach leis an Maolán RW1, cuir 80 mL d'eatánól iomlán le Buffer RW2 agus measc go maith ar leithligh.

4. Tá seastáin mhaighnéadacha ag teastáil ach níl siad ar fáil sa trealamh seo.

 

 

1. Caolú 10 × Maolán Lysis cille Deirge: caolaigh go 1 × Maolán Lysis cille Deirge le RNase-Free ddH2O. (mar shampla, tóg 140 μL as Maolán Lysis cille Deirge 10 × más é 200 μL toirt an tsampla fola atá le cóireáil).

2. Cuir 5 imleabhar de 1 × Maolán Deargcheall Lysis le 1 toirt iomlán fola úr agus measc go maith. (mar shampla, cuir 1ml de Mhaoláin Lysis ceall dearg 1 × más é 200 μL toirt an tsampla fola).

3. Goir ar an oighear ar feadh 15 nóiméad agus measc suas taobh agus síos ar feadh 2-3 uair le linn goir.

Nóta: Le linn goir, éireoidh an meascán tréshoilseach, rud a léiríonn go bhfuil cealla fola dearga go hiomlán lysed. Ag brath ar mhéid lysis an tsampla fola, is féidir an t-am goir a leathnú go 20 nóiméad.

4. Lártheifneoir ag 3,000 rpm ar feadh 10 nóiméad ag 4 chéim chun an comhshnáthán a bhaint go hiomlán.

Nóta: Ná cuir asú an deascán leukocyte, le do thoil.

5. Cuir 1 × Maolán Lysis cille Deirge de 2 uair toirt an tsampla fola leis an deascán leukocyte (m.sh. más é 200 µL toirt an tsampla fola, ansin ba chóir 400 µL de 1 × Maolán Lysis Cille Deirge a chur leis) a chur ar fionraí. deascán leukocyte.

6. Lártheifneoir ag 3,000 rpm ar feadh 10 nóiméad ag 4 chéim chun an comhshnáthán a bhaint go hiomlán. Ná asú an deascán leukocyte

7. Cuir deascán leukocyte fionraí Buffer BRL leis de réir toirte an tsampla fola (cinntigh go gcuirtear tuaslagán DTT leis roimh úsáid). Má tá toirt an tsampla fola níos lú ná 0.5 mL, cuirfear 400 μL de Buffer BRL leis; más é 0.5-1.5 mL toirt an tsampla fola, cuir 600 μL de Buffer BRL leis.

8. Cuir 2/3 toirte isopropanol leis an bhfeadán lártheifneora, meascáin bun os cionn agus síos. Agus ansin cuir 20 μL de Coirníní SweMag leis an meascán (ní mór Coirníní SweMag a athchur go hiomlán agus a dháileadh go cothrom roimh úsáid), agus meascadh go maith le pípéad.

9. Seas ag teocht an tseomra ar feadh 10 nóiméad agus measc go maith le pípéad 3-5 uair le linn socrúcháin.

10. Cuir an feadán lártheifneora ar sheastán maighnéadach ar feadh 30 soicind. Ansin cas go mall an feadán lártheifneoir suas agus síos arís agus arís eile in éineacht leis an seastán maighnéadach chun na coirníní maighnéadacha iarmharacha ar bhalla an fheadáin a nigh, agus ansin an comhshnáthán a asú agus a chaitheamh amach nuair atá sé soiléir.

11. Cuir 500 µL de Mhaoláin RW1 leis agus píb suas agus síos go réidh chun na coirníní maighnéadacha a athbhrú. Agus ansin cuir an feadán ar sheastán maighnéadach ar feadh 30 soicind. Ansin cas go mall an feadán lártheifneoir suas agus síos arís agus arís eile in éineacht leis an seastán maighnéadach chun na coirníní maighnéadacha iarmharacha ar bhalla an fheadáin a nigh, agus ansin an comhshnáthán a asú agus a chaitheamh amach nuair atá sé soiléir.

12. Cuir 500 µL de Mhaoláin RW2 leis, bain an seastán maighnéadach , pípéad suas agus síos go réidh chun na coirníní maighnéadacha a athbhrú. Ansin cuir an feadán ar sheastán maighnéadach ar feadh 30 soicind. Ansin cas go mall an feadán lártheifneoir suas agus síos arís agus arís eile in éineacht leis an seastán maighnéadach chun na coirníní maighnéadacha iarmharacha ar bhalla an fheadáin a nigh, agus ansin an comhshnáthán a asú agus a chaitheamh amach nuair atá sé soiléir.

13. Bain an seastán maighnéadach le haghaidh díleá DNA I:

a. Ullmhaigh réiteach oibre DNase I: Tóg 10 μL de Mhaoláin 10 × DNase, 10 μL de DNase, 80 μL d'Uisce Gan Núicléas agus measc go maith i bhfeadán lártheifneoir saor ó núicléas.

b. Cuir 100 µL de thuaslagán oibre DNase I leis an bhfeadán ina bhfuil na coirníní maighnéadacha, agus cuir suas agus síos go réidh é chun na coirníní maighnéadacha a athbhrú. Seas ag teocht an tseomra ar feadh 15 nóiméad agus measc go maith le gach 5 nóiméad le linn goir.

c. Tar éis díleá DNase I, cuir 600 µL de Maolán RW2 leis agus pípéad suas agus síos go réidh chun na coirníní maighnéadacha a athbhrú. Agus ansin cuir an feadán ar sheastán maighnéadach ar feadh 30 soicind. Ansin cas go mall an feadán lártheifneoir suas agus síos arís agus arís eile in éineacht leis an seastán maighnéadach chun na coirníní maighnéadacha iarmharacha ar bhalla an fheadáin a nigh, agus ansin an comhshnáthán a asú agus a chaitheamh amach nuair atá sé soiléir.

14. Déan céim 12 arís.

15. Oscail clúdach an fheadáin lártheifneora, fág é ag teocht an tseomra ar feadh 5-10 nóiméad chun galú iomlán an eatánóil iarmharaigh a chinntiú. (Ná lig dóibh triomú ionas nach gcuirfear isteach ar an táirgeacht aigéid núicléasaigh.)

16. Bain an seastán maighnéadach amach, cuir 30–50 µL d'Uisce Gan Núicléas leis agus píb suas agus síos go réidh chun na coirníní maighnéadacha a athbhunú, seas ag teocht an tseomra ar feadh 5 nóiméad.

17. Cuir an feadán ar sheastán maighnéadach chun na coirníní a bhailiú in aghaidh thaobh an fheadáin, ansin asú an fheadáin isteach i bhfeadán nua lártheifneora saor ó Núicléas chun RNA ardíonachta a fháil.

 

 

1. Léigh an Lámhleabhar Táirge go cúramach le do thoil roimh úsáid.

2. Is é 1.5 mL (comhaireamh WBC 1 × 107) an tréchur sampla uasta den trealamh seo, agus is féidir an méid fola a úsáidtear a laghdú go comhréireach má tá cion ard leukocyte san fhuil.

3. Tá an trealamh seo oiriúnach le haghaidh íonú RNA fola a chaomhnaítear le gnáth-fhrith-theaguláin (lena n-áirítear sóidiam heparin, EDTA, citrate sóidiam, etc.).

4. Ba cheart go seachnódh fionraí coirníní maighnéadach oibriú reo le linn stórála; tá coirníní maighnéadacha éasca le socrú, agus ba chóir iad a chroitheadh ​​​​go leor chun iad a choinneáil i bhfionraí aonfhoirmeach roimh úsáid.

5. Sula gcuirfear na coirníní maighnéadacha leis, is gá imoibrithe eile a mheascadh go maith.

6. Ba cheart an t-eatánól a luainiú go hiomlán sula n-éilítear RNA chun eatánól iarmharach a sheachaint a dhéanann difear do thurgnaimh le sruth.

7. Ná tirim na coirníní ar feadh i bhfad mar d'fhéadfadh sé seo tionchar a imirt ar éifeachtúlacht elution RNA.

8. Caith cóta saotharlainne, lámhainní indiúscartha, masc, seachain caint, agus bain úsáid as leideanna saor ó núicléas agus feadáin lártheifneora.

9. Ba cheart binsí saotharlainne speisialaithe agus trealamh leictreafóiréis a úsáid le haghaidh ionramhála RNA.

 

Chun Úsáid Taighde Amháin!

 

 

Clibeanna Te: trealamh eastóscadh rna iomlán fola magbind, monaróirí trealamh eastóscadh rna iomlán fola magbind tSín, soláthraithe, monarcha