Meán Scaradh Limpicítí (Coinín)

Is réiteach deighilte dlús grádán é an táirge seo atá oiriúnach chun limficítí fola imeallacha coinín a scaradh. Tá a phrionsabal bunaithe go príomha ar an difríocht dlúis idir fuilchealla forimeallacha éagsúla (tá dlús na gcealla fola dearga agus granulocytes thart ar 1.090 g/mL; tá pláitíní 1.030-1.035 g/ mL; tá limficítí agus monaicít 1.075-1.090 g/mL) agus tá siad scartha ó fhuil imeallach trí lártheifneoiriú dlús grádáin. Tá an táirge seo steiriúil, leibhéal íseal endotoxin réiteach deighilte réidh le húsáid le dlús de 1.083 ± 0.001 g/mL (20 céim ). Tá an táirge optamaithe ar bhonn Ficoll-meglumine traidisiúnta chun cobhsaíocht an réitigh deighilte a choinneáil ar feadh tréimhse níos faide tar éis cur fola, tá an oibríocht simplí agus tá na limficítí scoite íonachta ard agus riocht maith.

Long le h-oighear fliuch;Store 2-8 céim ar shiúl ón solas, bailí ar feadh 12 mhí.

Chun 1 mL de limficítí fola forimeallacha coinín a scaradh, is é 1:1-1:2 cóimheas toirte na fola go meán deighilte limficítí, le coigeartuithe cuí laistigh den raon seo; Ba chóir a bheith cúramach agus an feadán lártheifneoir á roghnú nach mó ná dhá thrian de thoirt an fheadáin méid iomlán na fola agus an mheán deighilte limficítí.

1. Glac 1 mL de fhuil iomlán úr antaithéachtach (is féidir heparin, EDTA, chiotráite sóidiam agus frith-theagmhálacha eile a úsáid), caolaigh le méid comhionann PBS (molta G4202) nó maolán Hanks (molta g4203) nach bhfuil aon cailciam agus maignéisiam ann. 2 ml d'fhuil iomlán caolaithe.

2. Pípéad 3 ml de thuaslagán leithlisithe limficítí fola imeallach ó francaigh agus lucha isteach i bhfeadán lártheifneoir steiriúil 15 ml (EP-1500-Moltar J).

3. Tilt an feadán lártheifneoir ag 45 céim agus cuir 2 ml d'fhuil chaolaithe go mall ar bhalla an fheadáin isteach sa fheadán lártheifneora, ionas go mbeidh an fhuil suite cothrom ar an gciseal uachtarach de mheán deighilte limficítí fola imeallach an choinín.

4. Moltar lártheifneoir ceann cothrománach a úsáid, cuir an feadán san adapter ceann cothrománach, laghdaigh luas an lártheifneora (3-5 luasanna cuí) agus lártheifneoir ag 800 xg ar feadh 25 nóiméad ag teocht an tseomra.

5. Tar éis lártheifneoiriú, coinnítear an feadán go réidh ar raca feadáin agus breathnaítear srathú soiléir: is é an ciseal uachtarach an ciseal plasma; is é an ciseal lár uachtarach an ciseal lymphocyte; is é an ciseal lár íochtair an meánchiseal scaradh limficítí; agus is é an ciseal is ísle an ciseal erythrocyte agus granulocyte (féach an figiúr atá ceangailte).

6. Bain an ciseal plasma uachtarach agus déan an ciseal tunica albuginea (ciseal limficítí) a asú go cúramach i bhfeadán lártheifneora steiriúil nua.

7. Nigh le 8 mL de PBS (G4202 molta) nó maolán eile, lártheifneoir ag 100 xg ar feadh 10 nóiméad, ansin caith amach an comhshó

8. Déan Céim 7 (Roghnach);

9. Linfocítí a athchur sa mheán nó maolán riachtanach de réir chuspóir an turgnaimh.

10. Is féidir íonacht na limficítí a fheabhsú tuilleadh trí na limficítí athfhionraithe a phlandáil isteach i mias cultúir nó i bhfleascán, ag gor sa ghorlann ar feadh 1-2 h, agus ansin na cealla súite a aistriú chuig mias nó fleascán cultúir nua (roghnach ).

1. Ní mór an táirge a chothromú go hiomlán agus a mheascadh bun os cionn ag teocht an tseomra roimh úsáid. Is í an teocht cheart le haghaidh deighilte ná 18-25 céim .

2. Chun gníomhaíocht na limficítí a chothabháil, is fearr fuil úr anticoagulation a roghnú laistigh de 2 uair an chloig tar éis bailiú fola; Má tá gá le tuilleadh cultúir agus tástála ar na limficítí scoite, tabhair aird ar an oibríocht aiseipteach le linn bailiú agus scaradh fola.

3. An maolán a chaolú nó a ní, ná húsáid an maolán ina bhfuil iain chailciam agus mhaignéisiam chun comhiomlánú cille fola a sheachaint

4. Cuirfidh ionsú iomarcach comhpháirteanna lasmuigh den chiseal tunica albuginea de limficítí faoi deara roinnt granulocytes nó pláitíní ag an acomhal a mheascadh.

5. D’fhéadfadh tionchar a bheith ag difríochtaí idir samplaí fola ar na torthaí idirscartha. Is féidir an fórsa lártheifeacha agus an t-am a choigeartú go cuí de réir an staid iarbhír. Is iad 500-1000 g agus 20-30 nóiméid an fórsa lártheifeacha tagartha agus an raon ama.

6. Is gnách go socraíonn cealla fola dearga tar éis an fhuil agus an mheán deighilte lymphocyte a mheascadh ar feadh tréimhse áirithe ama.

7. Ar mhaithe le do shábháilteacht agus do shláinte, caith spéaclaí sábháilteachta, lámhainní nó éadaí cosanta.

Ceangaltán: Léaráid scéimreach de gach ciseal roimh agus tar éis scaradh

Níl an táirge seo ach chun críocha taighde eolaíoch, ní le haghaidh diagnóis chliniciúil!